Рекомбінантні білкові антигени часто мають кілька різних епітопів, деякі з яких є епітопами послідовності, а деякі є структурними епітопами.Поліклональні антитіла, отримані шляхом імунізації тварин денатурованими антигенами, являють собою суміші антитіл, специфічних до окремих епітопів, і можуть використовуватися загалом для виявлення природних структур або денатурованих білків-мішеней.Побічною перевагою використання денатурованих білків як імуногенів є те, що денатуровані білки, як правило, є більш імуногенними та можуть стимулювати сильну імунну відповідь у тварин.
Систему експресії Escherichia coli зазвичай обирають для антигенних цілей, оскільки це найбільш дорога система з точки зору часу та грошей.Щоб підвищити можливість експресії цільового білка та зручності очищення, іноді експресують лише невеликий фрагмент цільового білка, наприклад специфічний домен.
Тривимірна структура білків
Специфічний домен білка
Якщо метою приготування антитіл є виключно виявлення wb, економічно та швидко використовувати синтетичний малий пептид як антиген, але існує ризик слабкої імуногенності або нерегенності через невідповідний вибір пептидного сегмента.Оскільки приготування антитіл вимагає тривалого періоду, два або три різних пептидних сегменти часто вибирають для отримання антитіл з використанням поліпептидного антигену, щоб забезпечити успішність експерименту.
Чистота поліпептидного антигену для імунізації повинна бути більше 80%.Хоча вищий рівень чистоти теоретично може отримати антитіла з кращою специфічністю, на практиці тварини завжди виробляють велику кількість неспецифічних антитіл, таким чином маскуючи переваги чистоти антигену.
Крім того, препарат антитіл з малих пептидів повинен бути зшитий з відповідним антигеном-носієм для підвищення його імуногенності.Двома поширеними носіями антигенів є KLH і BSA.
Час публікації: 23 березня 2023 р