У біологічних дослідженнях зазвичай використовують поліпептиди з довгою послідовністю.Для пептидів з більш ніж 60 амінокислотами в послідовності для їх отримання зазвичай використовується експресія генів і SDS-PAGE.Однак цей метод займає багато часу, і кінцевий ефект розділення продукту є поганим.
Проблеми та рішення для тривалого синтезу пептидів
У синтезі довгих пептидів ми завжди стикаємося з проблемою, тобто стерична перешкода реакції конденсації зростає зі збільшенням послідовності в синтезі, і час реакції потрібно регулювати, щоб реакція була повною.Однак чим довший час реакції, тим більше побічних ефектів виробляється, і утворюється частина цільового пептиду.Такі залишки – дефіцитні пептидні ланцюги є ключовими домішками, що утворюються в довгому синтезі пептидів.Отже, у синтезі довгого пептиду ключовою проблемою, яку ми повинні подолати, є дослідження високоякісних умов реакції та методів реакції, щоб зробити реакцію конденсації амінокислот більш всебічною та повною.Крім того, зменшіть час реакції, оскільки чим довший час реакції, тим більше неконтрольованих побічних реакцій, тим складніші побічні продукти.Таким чином, підсумовуються такі три моменти:
Мікрохвильовий синтез можна використовувати: Для деяких амінокислот, які зустрічаються в процесі синтезу і які нелегко інтегрувати, можна використовувати мікрохвильовий синтез.Цей метод має чудові результати та значно скорочує час реакції та зменшує утворення двох ключових побічних продуктів.
Можна використовувати метод фрагментного синтезу: Коли деякі пептиди складно синтезувати звичайними методами синтезу, і їх нелегко очистити, ми можемо застосувати повну конденсацію кількох амінокислот у певному сегменті пептиду до пептидного ланцюга в цілому.Цей метод також може вирішити багато проблем синтезу.
Може бути використаний синтез ацилгідразиду: ацилгідразидний синтез пептидів - це метод твердофазного синтезу N-кінцевого пептиду Cys і С-кінцевого поліпептиду гідразидної хімічної селективної реакції між утворенням амідних зв'язків для досягнення методу пептидного зв'язку.Базуючись на положенні Cys у пептидному ланцюзі, цей метод розділяє весь пептидний ланцюг на кілька послідовностей і синтезує їх відповідно.Нарешті, цільовий пептид отримують за допомогою реакції рідкофазної конденсації.Цей метод не тільки значно скорочує час синтезу довгого пептиду, але й значно підвищує чистоту кінцевого продукту.
Довге очищення пептидів
Специфіка довгих пептидів неминуче призводить до складних компонентів сирих пептидів.Тому очищення довгих пептидів за допомогою ВЕРХ є також складним завданням.амілоїдна серія процесу очищення поліпептидів, що поглинає великий досвід і успішно використовується для очищення довгого пептиду.Завдяки застосуванню нового обладнання, змішуванню кількох систем очищення, повторному поділу та іншим досвідченим методам успішність тривалого очищення пептидів була значно покращена.
Час публікації: 18 квітня 2023 р